1. 什么样的蛋白质分子可以用核磁共振检测答通常来说用于核磁共振检测的蛋白质分子的分子量需要小于30kDa浓度要大于0.5mM体积450uL500uL。具体来说也跟蛋白质分子本身的结构特定和用户需要获得的信息相关如果仅需要做一维核磁共振实验分子量可以扩展到100kDa浓度最低可以到0.01mM如果需要做二维实验的话分子量可以到50kDa浓度最低可以到0.1mM如果需要做三维实验分子量必须小于30kDa最好小于25kDa浓度至少0.5mM。二维和三维实验需要在同位素标记的样品中完成。另外无结构区较多的蛋白质信号强度会很强谱图分辨率会差beta折叠的蛋白分辨率要好于全alpha螺旋的蛋白建议在考虑使用核磁共振研究蛋白质时先进行一下二级结构预测。2. 不同核磁共振实验需要使用什么样品的蛋白质分子样品答一维H谱二维同核H谱不需要对蛋白质分子进行同位素标记天然态就可以完成。异核H-C和H-N的二维实验、三维实验都需要对C和N进行同位素标记。3. 核磁共振样品制备时缓冲体系有什么要求答缓冲体系可以使用磷酸盐等溶剂分子不含H的体系也可以使用Tris、MES等溶剂分子含氢的体系对于有同位素标记的样品的二维和三维异核实验含氢的体系影响不大。总体来说PBS缓冲体系更适合做核磁共振分析。缓冲体系中总的盐离子浓度要低于300mM如果要获得氨基氢的信息pH值需要小于7.5需要加入5%的重水用于锁场、匀场加入内标物质用于化学位移校准。另外根据样品的实际情况蛋白酶抑制剂等其他添加剂都可以加。4. 一维、二维和三维实验能够得到哪些信息答一维氢谱配合二维同核氢谱可以在不进行蛋白质标记的情况下了解蛋白质整体折叠情况样品是否聚集等。二维异核实验可以用于研究蛋白质和配体的相互作用对于已有主链归属的情况下可以直接测得蛋白质分子的作用位点对于没有主链归属的蛋白质分子可以了解蛋白质分子是否与配体发生相互作用。三维的三共振实验主要用于主侧链化学位移归属三维NOE实验主要用于获取空间结构信息结合主侧链化学位移归属可以进行三维结构计算。5. 超低温探头能够做到多低的温度答有不少不太了解核磁共振的用户会问这个问题这个问题是完全不成立的超低温探头和实验温度没有任何关系超低温探头是用冷的He对探头检测线圈降温提高检测线圈检测的灵敏度因此超低温探头的仪器灵敏度是相应常温探头的4倍超低温探头和实验温度无关实验温度是由其他硬件控制。目前所有液体核磁共振的实验温度范围是4度40度需要注意的是低温时核磁共振的灵敏度也会降低建议在样品温度的情况下尽量在较高的实验温度下进行。