小分子亲和探针:生物素标记双氢青蒿素Biotin-DHA靶点垂钓工具
生物素-双氢青蒿素 Biotin-DHA双氢青蒿素DHADihydroartemisinin是青蒿素最重要活性衍生物不仅具备强效抗疟活性近年大量研究证实其拥有抗肿瘤、抗纤维化、调控铁死亡、抗炎、免疫调节等广泛药理作用。生物素 - 双氢青蒿素Biotin-DHA亲和探针依托小分子 Pull-down 结合 LC-MS 化学蛋白质组学直接从细胞裂解液捕获 DHA 互作蛋白把 “预测靶点” 推进到 “实验验证靶点”是青蒿素类化合物机制研究不可或缺的化学工具。一、合成路线C10 羟基醚化引入氨基 Linker Biotin-NHS 偶联【Pull-down 首选】1.DHA C10-OH 与氨基烷基卤化物发生醚化引入末端游离伯氨基2.无水体系惰性气体保护避免过氧桥降解3.氨基与Biotin-LC-NHS / Biotin-PEG4-NHS发生酰胺偶联优势 完整保留过氧桥、内酯骨架修饰位点远离药效核心区域酰胺键生理缓冲液稳定不易水解Linker 推荐 基础筛选6 碳烷基 LC 接头活细胞体系、降低非特异吸附PEG4 柔性接头。二、理化性质外观白色 / 浅淡黄色冻干粉末溶解性脂溶性较强易溶于无水 DMSO、DMF、甲醇几乎不溶于纯水细胞实验建议与 BSA 预复合防止析出。储存规范 固体粉末-20℃避光、密封干燥、氮气保护 DMSO 母液分装-80℃冻存严禁反复冻融稳定性特点 过氧键光敏、对酸碱敏感所有操作尽量避光减少室温长时间放置。三、科研应用场景1.小分子 Pull-down LC-MS最主要用途捕获双氢青蒿素直接结合蛋白疟原虫相关靶蛋白抗疟机制研究肿瘤通路蛋白、铁死亡调控蛋白GPX4、FABP 家族等纤维化、炎症、免疫相关效应蛋白Pull-down 必备三组对照缺一不可1游离生物素阴性对照2Biotin-Linker 空白对照排除接头非特异性吸附3游离双氢青蒿素竞争对照组验证结合特异性2. 细胞荧光示踪成像Biotin-DHA 孵育细胞荧光标记链霉亲和素染色观测 DHA 细胞膜结合、胞内转运、亚细胞器定位。3. SPR / MST 体外亲和力定量测定探针与重组靶蛋白结合常数\(K_d\)开展竞争性结合实验验证分子互作。4. 青蒿素衍生物先导化合物开发筛选全新靶点解释双氢青蒿素脱靶效应、耐药机制为青蒿素新药研发提供依据。生物素-妥布霉素生物素标记杠柳麻甙生物素-胍基丁胺生物素-哌啶酸生物素-氨基已二酸生物素-辛酰-L-肉碱生物素-皮质醇生物素-二氢咖啡酸生物素-冰片生物素-井冈霉素生物素-左旋多巴生物素-胆固醇琥珀酸单酯生物素-胆固醇生物素-烟酰胺生物素-3β-羟基-5-胆稀酸生物素-全氟辛酸生物素-γ-氨基丁酸,Biotin-GABABiotin-Gambogenic acid生物素-甘油磷酸钠盐Biotin-Putrescine生物素-昆布多糖Biotin-ALCARBiotin-HydrazideBiotin-AbacavirBiotin-CD环糊精生物素-人参皂苷Rg1